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>   首頁   >   支持   >   實驗指南   >   ABGENT常規多克隆抗體制備流程   
1免疫動物:選取健康新西蘭兔一只。
2佐劑:首先用完全弗氏佐劑(CFA),后用不完全弗氏佐劑(IFA)。
3免疫原:蛋白或KLH偶聯的多肽。每次免疫100-200μg免疫原。
4免疫:用生理鹽水稀釋免疫原,然后與相應的佐劑進行1:1混合??乖妥艏鐐耆旌閑緯晌榷ǖ娜榧?,用注射器抽取抗原混合物,于兔子雙肩皮下兩點和雙后腿肌肉兩點注射抗原。每個區域大約1/4體積的免疫原。這樣免疫原可以持久存在從而提高免疫應答。
5取血:用19號針頭對兔子進行耳動脈取血,室溫過夜析出血清。
6 第1天 免1: 采5ml全血(可獲得2-3ml免疫前血清)室溫靜置過夜,第二天離心后分裝。用完全弗氏佐劑(CFA)混合的200μg抗原免疫兔子;
第15天 免2: 用完全弗氏佐劑(CFA)混合的200μg抗原免疫兔子;
第29天 免3: 用不完全弗氏佐劑(IFA)混合的100μg抗原免疫兔子;
第43天 采1:采全血5ml,進行ELISA或WB檢測;
第44天 免4:用不完全弗氏佐劑(IFA)混合的100μg抗原免疫兔子;如采1 Elisa轉陽則開始收集血清,采血30ml收集約15ml血清;
第58天 采2:如采1 Elisa未轉陽仍然采小樣(同采1),送實驗室待檢測結果;
第59,73天… 免5,采3:往后以此類推,間隔2周采血,如Elisa轉陽則開始收集血清,轉陽后的兔號共收集5次血清(總量70-80ml血清)后放血。
7注意:在整個項目中,兔子需要保持10周的免疫和放血。檢測的結果將決定這個項目的繼續、修改或終止。
8 純化:多肽親和純化抗體或Protein A/G 純化抗體。
9 檢測:抗體ELISA、WB、IHC和IF應用驗證。