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>   首頁   >   支持   >   實驗指南   >   ABGENT 酶聯免疫(ELISA)實驗操作流程   

1.溶液和試劑

传奇霸业代言人 www.lgcev.icu 1)10 X PBS: 80g NaCl,2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和2.4g KH2PO4 加1 L純水,調pH至 7.4
2)包被液:1X PBS
3)洗滌液:含0.05% Tween-20 的1X PBS(1X PBST)或純水
4)封閉液:10 mg/ml BSA(1% BSA,1X PBS配置)
5)抗體稀釋液:一抗、二抗均用1%BSA-PBS
6)2M H2SO4終止顯色: 108ml 98%H2SO4,加純水稀釋到1L

2.實驗步驟

1抗原準備:將抗原按適當濃度溶解于包被液中;
2包被:在對應的孔中加入100μl抗原,37℃孵育2小時或4℃過夜;
3洗滌:倒空液體并拍干殘留液體,洗滌液沖洗5次; 
4封閉:每孔加200μl封閉液,37℃孵育1小時; 
5洗滌:倒空液體并拍干殘留液體,洗滌液沖洗3次;
6一抗:每孔加100μl一抗,37℃孵育2小時;
7洗滌:倒空液體并拍干殘留液體,洗滌液沖洗7次;
8二抗:每孔加100μl二抗,37℃孵育1小時;
9洗滌:倒空液體并拍干殘留液體,洗滌液沖洗7次;
10顯色:拍干孔中殘留液體,每孔加100μl TMB顯色液,37℃避光顯色10min;
11檢測:每孔加50μl 2M H2SO4終止顯色,并立即讀取450nm OD值。